通過檢測血液或尿液中少量的RNA來診斷或治療疾病是一個新興領域。隨著技術的進步，研究人員可以對RNA片段進行測序，但不同的人使用不同的方法來測序RNA，有時會得到不同的結果，這是影響成功的一個重大障礙，使得此領域很難取得進展。近來，密歇根大學Tewari教授的實驗室領導了美國和荷蘭的9個實驗室組成聯(lián)盟，通過美國國立衛(wèi)生研究院，試圖解決這個問題。該聯(lián)盟測試了9種不同的RNA測序方法，以了解和標準化測序小RNA的最佳方法，他們的目標是創(chuàng)建一個可以從一個實驗室復制到另一個實驗室的標準。

基于RNA的液體活檢主要依賴于對小RNA測序的能力，例如microRNA。這些微小的細胞碎片可以在癌癥等疾病中發(fā)生改變，為早期發(fā)現(xiàn)疾病提供線索。但是，血液或尿液只含有少量的細胞外RNA，這使得測序變得更具挑戰(zhàn)性。

Tewari教授說：“RNA液體活檢是一個令人興奮的診斷新領域。因為不同的方法可能會帶來不同的結果，所以這個領域需要一個聯(lián)盟。”他還指出，這項工作的優(yōu)勢在于將不同的專業(yè)知識匯集在一起，從分子生物學家到生物信息學專家。

7月16日，這項在《Nature Biotechnology》雜志上發(fā)表的題為“Comprehensive multi-center assessment of accuracy, reproducibility and bias of small RNA-seq methods for quantitative miRNA profilin”的研究中，科學家們對樣本進行了相同的準備，并將其送往全球的9個實驗室進行分析。每個實驗室使用9種不同的測試方法對四個不同的樣本（一個血漿樣本和三個合成RNA樣本）進行測序。最終，他們共獲得超50億的測序結果。

“我們發(fā)現(xiàn)，不僅不同的方法產(chǎn)生不同的結果，而且在同一測序方法中，任何微小的變化都會帶來一個顯著的變化。該研究的主要作者、Tewari實驗室的博士后研究員Maria D. Giraldez說：“為了比較各實驗室結果之間的差異，我們需要一套通用、高度標準化的方法指南。”

該研究的作者、Tewari實驗室的Ryan Spengler博士后研究員說：“如果你在多個實驗室使用相同的方法，結果就不會有太大的變化。”“這意味著，如果你想在不同的實驗室之間協(xié)調一項研究，關鍵是要遵守同樣的方法。”

由聯(lián)盟實驗室開發(fā)的方法提高了液體活檢的準確性。當用RNA測序來比較不同樣本之間個體microRNA的相對數(shù)量時，所有的方法都產(chǎn)生了準確和可重復的估計。該研究為創(chuàng)建標準程序的方法奠定了基礎，并推動RNA測序和液體活檢領域的進步。

研究人員已經(jīng)制作出了綜合參考材料，這意味著全國的研究人員都可以按照他們的方法進行測試，并將結果與實驗室聯(lián)盟發(fā)現(xiàn)的結果進行比較。Tewari的實驗室正在繼續(xù)致力于改進方法，以便更有效地發(fā)現(xiàn)生物標記物。

參考資料：

1）Overcoming a major barrier to developing liquid biopsies

2）Comprehensive multi-center assessment of accuracy, reproducibility and bias of small RNA-seq methods for quantitative miRNA profiling, Nature Biotechnology (2018). DOI: 10.1038/Nbt.4183, https://www.nature.com/articles/Nbt.4183

原標題：液體活檢新突破！科學家們開發(fā)出“RNA測序”的通用模板